收藏：0- 资源标识：CSTR:13153.11.20150110.AMD.ALDPDMM.01.KIZ
- 数据时间：2015 年 1 月 10 日
- 动物品种：猕猴
- 关键词：帕金森病，精确定位，猕猴模型，运动症状，病理改变，MPP+
- 学科分类：神经生物学
- 数据分类：动物模型数据，基础信息数据，行为学数据，组织学数据，生化数据
- 共享方式：协议共享
- 所有者：胡新天课题组
- 单位：中国科学院昆明动物研究所
- 地址：云南省昆明市盘龙区茨坝街道龙欣路17号
- 邮编：650201
- 邮箱：lihao@mail.kiz.ac.cn
- 联系人：李瑞
- 服务电话：0871-68424851
- 服务邮箱：nhp@mail.kiz.ac.cn
- 服务单位：国家非人灵长类实验动物资源库
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预定
我们利用基于 MRI 的猴脑精确立体定位方法，直接将 MPP+溶液注射到成年猕猴偏侧黑质，建成了具备典型、稳定帕金森病临床症状，且基本生理状况良好的猕猴偏侧帕金森病急性模型。
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- 数据详细描述
- 数据文件列表
- 文献引用方式
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a. 行为学数据
为了评估猕猴 PD 症状，我们从两方面收集行为数据：1）记录猕猴的日常行为量化 PD 症状，使用改进版 Kurlan 量表（旧大路猴帕金森病经典评定量表）进行评分；2）通过阿扑吗啡（Apo）诱导的旋转反映黑质-纹状体多巴胺功能缺陷。
我们利用数码相机（Sony HDR-XR260，日本）收集每只猕猴的录像，每周三上午十点进行。
为了检测 MPP+对黑质-纹状体多巴胺功能的影响，我们采用经典的药理学试验，即 Apo 诱导的旋转进行评估。首先，在 1 小时的视频中，从第 15 分钟到第 45 分钟的 30 分钟内，对每只猕猴自发旋转进行计数。
其次，猕猴肌注 Apo 10 分钟后，再次拍摄 1 小时的视频。同样从第 15分钟到第 45 分钟的 30 分钟内进行旋转计数。注射前 5 分钟，将 2 mg的 Apo 溶解于 2 mL（1 mg/mL）的维生素 C 溶液（0.5 mg/2 mL）。同样在每周三上午，行为录像后进行药理学测试。
b. 生理数据采集
术前、术后 1-8 周、术后每月给猕猴测量呼吸频率和体重。术前、术后 1-4 周、术后每月给猕猴抽取静脉血进行血常规和血生化监测。呼吸测量由实验人员为安静猕猴计数 1 分钟所得。体重称量和血液采集前对猕猴进行兽用氯胺酮（0.5-0.7 mL，0.15 mg/mL）肌注诱导麻醉。静脉血采集通过四肢浅表静脉或股静脉穿刺抽取 2-3 ml 血液进行，抽血前常规消毒，抽血后按压止血。
c. PD 病理染色
TH 染色：猕猴双侧黑质以及纹状体的冠状切片用 3% H2O2（5 min）、3% triton X-100（4 min，中国北京索莱宝）和山羊血清（15 min，中国福州迈新）处理，然后兔抗 TH 抗体（1:1000，AB152，Millipore）4 °C过夜。次日，切片与二抗（PV-9000，30 min，中国北京中杉金桥）37 °C孵育。之后 DAB 显色 2 min（DAB-1031 Kit，20×，中国福州迈新）。
尼氏染色：切片经二甲苯与梯度酒精脱脂后蒸馏水洗净，放入 Nissl染色液室温下 20 分钟，蒸馏水洗净染液后酒精梯度脱水（70%，80%，95%，各 1 min），特殊分色液中分色 5 min，无水酒精脱水和二甲苯透明，中性树胶封片（镜检奥林巴斯显微镜 CX41，摄像头：奥林巴斯DP25，软件：CellSens Entry 1.4.1，日本）。
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a. 行为学数据
两名有经验的视频分析员参与录像分析。评分者不知每只猕猴的实验操作，他们使用改进版 Kurlan 量表（Smith RD, Zhang Z, Kurlan R,McDermott M, Gash DM. Developing a stable bilateral model of parkinsonism in rhesus monkeys. Neuroscience 1993, 52: 7-16）对视频片段打分。该量表包括 4 个部分：A 部分：帕金森病特征；B 部分：药物副作用；C 部分：总体活动水平；D 部分：临床分期。PD 评分依据A 部分得出，总分为 20，包括震颤：0-3；姿势：0-2；步态：0-4；运动迟缓：0-4；平衡：0-2；总体运动技能：0-3；防御反应：0-2。两位评分者的得分如果没有明显差异（少于两分），将数据汇总；若评分出现较大差异，则由实验者检查，最终评分将通过一起观看视频确定。在旋转计数中，两名视频分析员同样不知猕猴的实验操作，统计视频中猕猴的旋转次数。
b. PD 病理特征染色数据
通过 ImageJ 软件（National Institutes of Health，Bethesda，Maryland，USA）在 40×物镜下对选定区域的黑质多巴胺能神经元（TH 阳性染色细胞）计数，将对照侧细胞计数平均值转化为 100%，损伤侧细胞数量平均值相应转化为所占对照侧的百分比。
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a. 实验动物和伦理
实验方案和动物福利获批编号：KBI K001113033-01, 01。6 只恒河猴单笼饲养，标准的明/暗周期，自由取食饮水，由兽医照看。
b. 行为数据采集要求：固定时间采样（上午 10：00），固定时长（猕猴单笼自由活动 1 小时），固定距离（录像机位于笼子前方 1 米处），在没有外部干扰的情况下记录。
c. 病理数据采集要求：黑质多巴胺能神经元主要位于黑质致密部，我们在 4×物镜（3.5 mm × 2.6 mm）、20×物镜（690.8 μm × 518.1 μm）和40×物镜（345.4 μm × 259 μm）下鉴定具备典型多巴胺能神经元形态且
呈现 TH 免疫组化阳性染色的细胞，以第三对脑神经 3n 为参考，选定黑质长轴近中心区域 40×物镜拍照用于细胞计数。
d. 以科学规范为原则，每条数据的采集、描述与数字化表达的每个环节均由专业人员操作，保证信息准确信及科学性。实验数据源于仪器测量，逐一录入。
